文/圖 福建大北農(nóng)水產(chǎn)科技神爽動保技術(shù)服務(wù)中心 黃廣富 秦波 毛毛
采集具有典型爛身癥狀的斜帶石斑魚、健康斜帶石斑魚、未發(fā)病池水和常用商品化治療藥品以進(jìn)行病原分離鑒定和藥敏分析，為該病病原確定和治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)踐指導(dǎo)。
斜帶石斑魚為福建省沿海養(yǎng)殖主要經(jīng)濟(jì)品種之一,由于近年來養(yǎng)殖戶過度追求經(jīng)濟(jì)效益，伴隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大經(jīng)常出現(xiàn)暴發(fā)性死亡現(xiàn)象。近年來每到5-10月份高溫季節(jié),斜帶石斑魚在幼魚到成魚階段出現(xiàn)一種“爛身病”，特別是在幼魚階段,會引起大量死亡，給福建沿海斜帶石斑魚養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
發(fā)病斜帶石斑魚，左為表皮輕微潰爛，右為嚴(yán)重至肌肉潰爛
2015年9月份在福建省漳浦縣深土鎮(zhèn)某石斑魚養(yǎng)殖場暴發(fā)“爛身病”，患病魚規(guī)格在7cm左右，爛身程度不一，輕者鱗片脫落從表皮開始潰爛直至真皮，重者肌肉發(fā)生潰爛露出脊椎骨。重度感染的斜帶石斑魚出現(xiàn)游動緩慢，體表發(fā)黑，抵抗力低等癥狀，死亡率高達(dá)80%以上。為了確定“爛身病”發(fā)病原因和治療方案，從該石斑魚養(yǎng)殖場采集具有典型爛身癥狀的斜帶石斑魚、健康斜帶石斑魚、未發(fā)病池水和常用商品化治療藥品以進(jìn)行病原分離鑒定和藥敏分析，為該病病原確定和治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)踐指導(dǎo)。
一、病原分離純化
使用70%的酒精棉球?qū)疾⌒睅唪~非潰爛部位進(jìn)行消毒，用火焰灼燒過的接種環(huán)挑取潰爛處少許組織于海水配制的BHI固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線，37℃培養(yǎng)18h。根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果挑取優(yōu)勢單菌落重新進(jìn)行劃線,同樣條件培養(yǎng)后使用革蘭氏染色確定是否有雜菌污染，結(jié)果表明優(yōu)勢菌呈現(xiàn)紅色，形態(tài)為桿狀并且具有一定的弧度。將純化后的單菌落在含有2% NaCl的BHI液體培養(yǎng)基中37℃、200r/min培養(yǎng)18h后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
分離的病原菌經(jīng)革蘭氏染色呈現(xiàn)紅色，形態(tài)為桿狀并且具有一定的弧度
二、病原菌的鑒定
將所得病原菌對健康斜帶石斑魚以口腔注射、腹腔注射和創(chuàng)傷浸泡進(jìn)行人工感染，使用所取未發(fā)病池水在詔安神爽動保技術(shù)服務(wù)中心循環(huán)水系統(tǒng)暫養(yǎng)。一個星期內(nèi)發(fā)現(xiàn)三種感染方式均能使斜帶石斑魚患“爛皮病”，創(chuàng)傷浸泡形成爛皮數(shù)量最多，其次腹腔注射，最后是口腔注射。使用16s rDNA通用引物：27F（5’- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’），1492R(5’- GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3’)對所篩選病原菌進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，將所得序列通過BLAST工具進(jìn)行比對，與哈維氏弧菌（Vibrio harveyi）的相似度為99%。
三、藥敏實(shí)驗(yàn)
1、四種常用消毒劑的對比實(shí)驗(yàn)選取福爾馬林（有效成分：37%-40%甲醛）、金碘（有效成分：聚維酮碘）、綠安（有效成分：月芐三甲氯銨）、衛(wèi)捷（有效成分：戊二醛、苯扎溴銨）四種常見消毒藥使用牛津杯法進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。吸取100μL培養(yǎng)后的病原菌液均勻涂布于使用海水配制的BHI固體培養(yǎng)上，然后將用雙蒸水稀釋后的不同消毒藥（2% W/V）100μL打入牛津杯中，共做六個平行，37℃培養(yǎng)18h后觀察抑菌效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，病原菌對福爾馬林最為敏感，抑菌圈直徑在30mm左右，其次是金碘，抑菌圈直徑在17mm左右，最后是衛(wèi)捷，抑菌圈直徑在15mm左右。通過六組實(shí)驗(yàn)表明綠安對病原菌并不敏感，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的抑菌圈。
2、五種抗生素藥品對比實(shí)驗(yàn)選取強(qiáng)力泰（有效成分：恩諾沙星）、呼樂芬（有效成分：氟苯尼考）、日本黃粉（有效成分：呋喃苯烯酸鈉）、魚血安（有效成分：鹽酸環(huán)丙沙星、鹽酸小檗堿）以及呋喃西林五種抗生素，同樣使用牛津杯法進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。稱取每種抗生素0.2g溶于50mL生理鹽水中配制成4g/L濃度的溶液。吸取100μL培養(yǎng)后的病原菌液均勻涂布于使用海水配制的BHI固體培養(yǎng)上，然后吸取100μL相應(yīng)的抗生素溶液于牛津杯中，連續(xù)做六個平行。37℃培養(yǎng)18h后觀察抑菌效果。結(jié)果顯示，五種抗生素藥品均對病原菌具有抑制作用，病原菌對日本黃粉最為敏感，抑菌圈直徑為35mm左右，呼樂芬次之，抑菌圈直徑為27mm左右，魚血安和強(qiáng)力泰抑菌效果相似，抑菌直徑分別在22mm和20mm左右，呋喃西林的抑菌效果不太穩(wěn)定，抑菌圈直徑在18mm左右。
四、防治建議
根據(jù)所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明哈維氏弧菌是引起斜帶石斑魚爛身并且大量死亡的主要病原，因此很有必要進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)篩選一種合適的內(nèi)服藥和一種水體消毒劑來對石斑魚“爛身病”進(jìn)行防治，以減少石斑魚養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失。
通過對市面上常見的水體消毒劑福爾馬林、金碘、綠安和衛(wèi)捷四種藥物的藥敏結(jié)果發(fā)現(xiàn)福爾馬林的抑菌效果最強(qiáng)，金碘效果次之。但是由于福爾馬林對人體及石斑魚具有一定毒副作用，安全性方面相對于金碘略有差距。因此綜合考慮對于外潑消毒劑以金碘（有效成分：聚維酮碘）最為合適。
對比五種抗生素藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)病原菌對日本黃粉最為敏感，但是屬于硝基呋喃類的廣譜抗菌藥物，對人體具有潛在的致突變和致癌性，不推薦使用。呼樂芬、魚血安和強(qiáng)力泰等三種抗生素安全性較高，可以作為防治石斑魚“爛身病”的內(nèi)服藥，根據(jù)抑菌效果建議優(yōu)先選擇呼樂芬（有效成分：氟苯尼考）。
筆者根據(jù)實(shí)地考察，發(fā)現(xiàn)部分石斑魚養(yǎng)殖戶為了過高追求經(jīng)濟(jì)利潤，養(yǎng)殖密度不斷提高，在高溫季節(jié)時一旦養(yǎng)殖水體出現(xiàn)惡化，引起“爛身病”的哈維氏菌將持續(xù)增殖，最終導(dǎo)致養(yǎng)殖的石斑魚大量死亡。因此通過搭設(shè)遮陽網(wǎng)控制好養(yǎng)殖池中水體溫度和調(diào)整養(yǎng)殖密度，能夠有效的預(yù)防石斑魚“爛身病”的發(fā)生。對于已經(jīng)發(fā)病的養(yǎng)殖池不要盲目的使用市面上的藥品，只有科學(xué)合理的使用水產(chǎn)藥物才能在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中更好的防治石斑魚“爛身病”，引導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展。
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