文/圖 福建大北農水產科技神爽動保技術服務中心 黃廣富 秦波 毛毛
采集具有典型爛身癥狀的斜帶石斑魚、健康斜帶石斑魚、未發病池水和常用商品化治療藥品以進行病原分離鑒定和藥敏分析，為該病病原確定和治療提供理論基礎和實踐指導。
斜帶石斑魚為福建省沿海養殖主要經濟品種之一,由于近年來養殖戶過度追求經濟效益，伴隨著養殖規模的擴大經常出現暴發性死亡現象。近年來每到5-10月份高溫季節,斜帶石斑魚在幼魚到成魚階段出現一種“爛身病”，特別是在幼魚階段,會引起大量死亡，給福建沿海斜帶石斑魚養殖業帶來巨大的經濟損失。
發病斜帶石斑魚，左為表皮輕微潰爛，右為嚴重至肌肉潰爛
2015年9月份在福建省漳浦縣深土鎮某石斑魚養殖場暴發“爛身病”，患病魚規格在7cm左右，爛身程度不一，輕者鱗片脫落從表皮開始潰爛直至真皮，重者肌肉發生潰爛露出脊椎骨。重度感染的斜帶石斑魚出現游動緩慢，體表發黑，抵抗力低等癥狀，死亡率高達80%以上。為了確定“爛身病”發病原因和治療方案，從該石斑魚養殖場采集具有典型爛身癥狀的斜帶石斑魚、健康斜帶石斑魚、未發病池水和常用商品化治療藥品以進行病原分離鑒定和藥敏分析，為該病病原確定和治療提供理論基礎和實踐指導。
一、病原分離純化
使用70%的酒精棉球對患病斜帶石斑魚非潰爛部位進行消毒，用火焰灼燒過的接種環挑取潰爛處少許組織于海水配制的BHI固體培養基上進行劃線，37℃培養18h。根據培養結果挑取優勢單菌落重新進行劃線,同樣條件培養后使用革蘭氏染色確定是否有雜菌污染，結果表明優勢菌呈現紅色，形態為桿狀并且具有一定的弧度。將純化后的單菌落在含有2% NaCl的BHI液體培養基中37℃、200r/min培養18h后用于后續實驗。
分離的病原菌經革蘭氏染色呈現紅色，形態為桿狀并且具有一定的弧度
二、病原菌的鑒定
將所得病原菌對健康斜帶石斑魚以口腔注射、腹腔注射和創傷浸泡進行人工感染，使用所取未發病池水在詔安神爽動保技術服務中心循環水系統暫養。一個星期內發現三種感染方式均能使斜帶石斑魚患“爛皮病”，創傷浸泡形成爛皮數量最多，其次腹腔注射，最后是口腔注射。使用16s rDNA通用引物：27F（5’- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’），1492R(5’- GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3’)對所篩選病原菌進行分子生物學鑒定，將所得序列通過BLAST工具進行比對，與哈維氏弧菌（Vibrio harveyi）的相似度為99%。
三、藥敏實驗
1、四種常用消毒劑的對比實驗選取福爾馬林（有效成分：37%-40%甲醛）、金碘（有效成分：聚維酮碘）、綠安（有效成分：月芐三甲氯銨）、衛捷（有效成分：戊二醛、苯扎溴銨）四種常見消毒藥使用牛津杯法進行藥敏實驗。吸取100μL培養后的病原菌液均勻涂布于使用海水配制的BHI固體培養上，然后將用雙蒸水稀釋后的不同消毒藥（2% W/V）100μL打入牛津杯中，共做六個平行，37℃培養18h后觀察抑菌效果。實驗結果顯示，病原菌對福爾馬林最為敏感，抑菌圈直徑在30mm左右，其次是金碘，抑菌圈直徑在17mm左右，最后是衛捷，抑菌圈直徑在15mm左右。通過六組實驗表明綠安對病原菌并不敏感，沒有發現明顯的抑菌圈。
2、五種抗生素藥品對比實驗選取強力泰（有效成分：恩諾沙星）、呼樂芬（有效成分：氟苯尼考）、日本黃粉（有效成分：呋喃苯烯酸鈉）、魚血安（有效成分：鹽酸環丙沙星、鹽酸小檗堿）以及呋喃西林五種抗生素，同樣使用牛津杯法進行藥敏實驗。稱取每種抗生素0.2g溶于50mL生理鹽水中配制成4g/L濃度的溶液。吸取100μL培養后的病原菌液均勻涂布于使用海水配制的BHI固體培養上，然后吸取100μL相應的抗生素溶液于牛津杯中，連續做六個平行。37℃培養18h后觀察抑菌效果。結果顯示，五種抗生素藥品均對病原菌具有抑制作用，病原菌對日本黃粉最為敏感，抑菌圈直徑為35mm左右，呼樂芬次之，抑菌圈直徑為27mm左右，魚血安和強力泰抑菌效果相似，抑菌直徑分別在22mm和20mm左右，呋喃西林的抑菌效果不太穩定，抑菌圈直徑在18mm左右。
四、防治建議
根據所得實驗結果證明哈維氏弧菌是引起斜帶石斑魚爛身并且大量死亡的主要病原，因此很有必要進行藥敏實驗篩選一種合適的內服藥和一種水體消毒劑來對石斑魚“爛身病”進行防治，以減少石斑魚養殖戶經濟損失。
通過對市面上常見的水體消毒劑福爾馬林、金碘、綠安和衛捷四種藥物的藥敏結果發現福爾馬林的抑菌效果最強，金碘效果次之。但是由于福爾馬林對人體及石斑魚具有一定毒副作用，安全性方面相對于金碘略有差距。因此綜合考慮對于外潑消毒劑以金碘（有效成分：聚維酮碘）最為合適。
對比五種抗生素藥敏實驗結果，發現病原菌對日本黃粉最為敏感，但是屬于硝基呋喃類的廣譜抗菌藥物，對人體具有潛在的致突變和致癌性，不推薦使用。呼樂芬、魚血安和強力泰等三種抗生素安全性較高，可以作為防治石斑魚“爛身病”的內服藥，根據抑菌效果建議優先選擇呼樂芬（有效成分：氟苯尼考）。
筆者根據實地考察，發現部分石斑魚養殖戶為了過高追求經濟利潤，養殖密度不斷提高，在高溫季節時一旦養殖水體出現惡化，引起“爛身病”的哈維氏菌將持續增殖，最終導致養殖的石斑魚大量死亡。因此通過搭設遮陽網控制好養殖池中水體溫度和調整養殖密度，能夠有效的預防石斑魚“爛身病”的發生。對于已經發病的養殖池不要盲目的使用市面上的藥品，只有科學合理的使用水產藥物才能在實際養殖生產中更好的防治石斑魚“爛身病”，引導水產養殖業健康持續發展。
中國鰻魚網報道
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